Elektroforeza o čemu se radi, čemu služi i kako se izrađuje
Elektroforeza je laboratorijska tehnika koja se izvodi s ciljem odvajanja molekula prema njihovoj veličini i električnom naboju, tako da se može postaviti dijagnoza bolesti, provjeriti ekspresija proteina ili prepoznati mikroorganizmi.
Elektroforeza je jednostavan i jeftin postupak, koji se koristi u laboratorijskim rutinama i u istraživačkim projektima. Prema namjeni elektroforeze, za dijagnozu može biti potrebno provesti druge testove i ispite, na primjer.
Čemu služi
Elektroforeza se može izvesti u različite svrhe, kako u istraživačkim projektima, tako i u dijagnostici, jer je to jednostavna i jeftina tehnika. Dakle, elektroforeza se može izvesti za:
- Prepoznati viruse, gljivice, bakterije i parazite, pri čemu je ova aplikacija češća u istraživačkim projektima;
- Test očinstva;
- Provjerite ekspresiju proteina;
- Prepoznati mutacije, na primjer, korisne u dijagnostici leukemije;
- Analizirajte vrste cirkulirajućeg hemoglobina, korisne u dijagnozi srpaste stanične anemije;
- Procijenite količinu proteina prisutnih u krvi.
U skladu s svrhom elektroforeze, za dovršenje dijagnoze liječnik će možda trebati provesti druge komplementarne testove.
Kako se to radi
Za elektroforezu je potreban gel koji može biti od poliakrilamida ili agaroze, ovisno o cilju, puferu elektroforeze i kade, markeru molekularne težine i fluorescentnom bojilu, uz UV ili LED svjetlosnu opremu, također poznat kao transiluminator.
Nakon pripreme gela, potrebno je postaviti određeni predmet, tako da su izrađene jažice u gelu, popularno zvane češalj, i pustiti da se gel postavi. Kad je gel spreman, samo nanesite tvari u jažice. Za to se u jednu jažicu mora staviti marker molekularne mase, pozitivna kontrola, to je tvar koja se zna što je, negativna kontrola, koja jamči valjanost reakcije, i uzorci koji se trebaju analizirati. Svi se uzorci moraju pomiješati s fluorescentnom bojom jer je na taj način moguće vizualizirati pojaseve na transilluminatoru.
Gel s uzorcima mora se staviti u posudu za elektroforezu koja sadrži specifičnu otopinu pufera, a zatim se uređaj uključuje tako da postoji električna struja i, posljedično, razlika potencijala, što je važno za odvajanje čestice prema njihovom opterećenju i veličini. Elektroforetsko vrijeme rada varira ovisno o cilju postupka i može trajati do 1 sat.
Nakon određenog vremena, moguće je vidjeti rezultat elektroforetske vožnje kroz transilluminator. Kada se gel stavi pod UV ili LED svjetlost, moguće je vizualizirati obrazac vezanja: što je veća molekula, to je manja njena migracija, što se više približava bušotini, dok je lakša molekula, veći je migratorni potencijal.
Da bi se reakcija potvrdila, potrebno je da se pojasevi pozitivne kontrole vizualiziraju i da se u negativnoj kontroli ništa ne vizualizira, jer je u protivnom indikacija da je došlo do kontaminacije, a cijeli se postupak mora ponoviti.
Vrste elektroforeze
Elektroforeza se može izvesti u različite svrhe i, prema svom cilju, može se upotrijebiti nekoliko vrsta gela, od kojih su najčešći poliakrilamid i agaroza..
Elektroforeza radi identificiranja mikroorganizama češće se izvodi u istraživačkim laboratorijima, međutim, u dijagnostičke svrhe elektroforeza se može koristiti za identificiranje hematoloških bolesti i bolesti koje se razvijaju s povećanjem količine proteina, a to su glavne vrste elektroforeze :
1. Elektroforeza hemoglobina
Elektroforeza hemoglobina je laboratorijska tehnika koja se izvodi za prepoznavanje različitih vrsta hemoglobina koji cirkulira u krvi, što omogućava identificiranje bolesti povezanih sa sintezom hemoglobina. Vrsta hemoglobina identificira se elektroforezom određenog pH, idealno između 8,0 i 9,0, s uzorkom traka koji se može provjeriti u usporedbi s normalnim uzorkom, što omogućava identifikaciju prisutnosti nenormalnih hemoglobina.
Za što je izrađen: Elektroforeza hemoglobina provodi se radi ispitivanja i dijagnosticiranja bolesti povezanih sa sintezom hemoglobina, poput srpaste stanične anemije i bolesti hemoglobina C, osim što je korisna u diferencijaciji talasemije. Naučite kako protumačiti elektroforezu hemoglobina.
2. Elektroforeza proteina
Elektroforeza proteina je test koji liječnik traži da procijeni količinu proteina koji cirkulira u krvi i na taj način utvrdi bolesti. Ovaj test se vrši iz uzorka krvi koji je centrifugiran da bi se dobila plazma, onaj dio krvi koji se, između ostalog, sastoji od proteina.
Nakon elektroforeze može se vizualizirati uzorak bendova, a nakon toga i grafikon u kojem je naznačena količina svakog dijela frakcije proteina koja je osnovna za dijagnozu.
Za što je izrađen: Elektroforeza proteina omogućava liječniku da ispita pojavu multiplog mijeloma, dehidraciju, cirozu, upalu, bolest jetre, pankreatitis, lupus i hipertenziju prema obrascu trake i grafikonu predstavljenom u izvješću o ispitivanju.
Shvatite kako se to radi i kako razumjeti rezultat elektroforeze proteina.
