Molekularna dijagnoza o čemu se radi, čemu služi i kako se radi
Molekularna dijagnoza odgovara skupu molekularnih tehnika kojima je cilj identificirati promjene u DNK koje bi, na primjer, mogle ukazivati na genetske bolesti ili rak. Osim toga, molekularne se tehnike široko koriste za identifikaciju i potvrdu zaraznih bolesti, jer predstavljaju bržu i precizniju dijagnostičku metodu.
Molekularna dijagnoza je skupa i, prema tome, liječnici je ne traže vrlo često, no ona daje točne rezultate s obzirom na prisutnost promjene, način na koji ona može ometati rad organizma i pacijentovu reakciju na liječenje.
Čemu služi
Molekularna dijagnoza može se izvesti s nekoliko ciljeva, a glavni su:
- Identifikacija mutacija povezanih s leukemija, kao što je identifikacija translokacije BCR-ABL, koja je karakteristična za kroničnu mijeloidnu leukemiju (CML);
- Karakteristične mutacije hematološke bolesti, kao što su nasljedna hemokromatoza, policitemija vera, esencijalna trombocitemija i trombofilija, na primjer.
- Molekularne promjene koje ukazuju na pojavu rak, poput kolorektalnog karcinoma, raka pluća, dojke i mozga, na primjer;
- Dijagnoza zarazne bolesti, kao što su hepatitis, uretritis, toksoplazmoza, lešmanijoza itd., uz HPV virus.
Molekularna dijagnoza, iako se smatra skupom u usporedbi s drugim dijagnostičkim tehnikama, je točnija, jer je u stanju informirati o promjeni povezanoj s određenom bolešću i stupnju utjecaja te promjene u tijelu, pomažući tako liječenju osobe..
Osim što se koriste za dijagnozu nekoliko bolesti, molekularne se tehnike koriste i za procjenu odgovora na liječenje, posebno kod osoba oboljelih od karcinoma, a to je jedna od najučinkovitijih metoda za naznačavanje napredovanja bolesti i recidiva..
Kako se to radi
Molekularna dijagnoza se može postaviti s bilo kojim uzorkom, a na zahtjev liječnika onaj koji najbolje može pružiti podatke o pacijentovom stanju, a to mogu biti mokraća, slina ili u većini slučajeva krv. Post ili bilo koja druga priprema nisu potrebni za ispit.
Uzorak se skuplja i šalje u laboratoriju, zajedno s uputama liječnika kojim se obavještava o ispitivanju ili vrsti istraživanja koje bi trebalo učiniti. Izvedena molekularna tehnika ovisi o ispitivanju koje se traži i uključuje niz preciznih postupaka kojima je cilj utvrditi prisutnost ili odsutnost promjena koje zahtijeva liječnik..
Obično se koristi samo mala količina poslanog uzorka, ostatak se pohranjuje tako da se, ako je potrebno, ispit ponovi.
Pogledajte koje su glavne molekularne tehnike
PCR
PCR, kratak za lančanu reakciju polimeraze ili Lančana reakcija polimeraze, je molekularna tehnika koja se sastoji od amplifikacije fragmenta genetskog materijala, bilo da se radi o DNK ili RNA, kako bi se identificirale mutacije i tako pomoglo u dijagnostici bolesti.
Ova tehnika izrađena je od ekstrakcije i pročišćavanja genetskog materijala, koji se zatim stavlja u mješavinu u kojoj je jedna od komponenti restrikcijski enzim koji varira u skladu s traženim ispitivanjem i čija je funkcija rezanje materijala na fragmente tako da se mogu utvrditi moguće genetske promjene. Smjesa se stavi u termocikler, što je uređaj koji djeluje kroz temperaturne promjene koje je pokazao stručnjak prema ispitivanju i na taj način omogućava pojačavanje genetskog fragmenta. U slučaju konvencionalne PCR, nakon amplifikacije PCR proizvod se podvrgne elektroforeza, što je molekularna tehnika zasnovana na težini i veličini fragmenata, tj. prema tim karakteristikama nastaje obrazac trake čija se analiza izrađuje na temelju pozitivnog kontrolnog pojasa, odnosno pojasa koji je poznat što odgovara genetskoj izmjeni.
PCR u stvarnom vremenu, koji se naziva i qPCR, to je vrsta kvantitativnog PCR-a, to jest, pored identificiranja genetske promjene, može pružiti informacije o ekspresiji gena, odnosno o tome koliko se promijenjeni gen izražava u organizmu, na taj način može biti koristi se za pomoć u dijagnostici i praćenju liječenja. PCR u stvarnom vremenu ne zahtijeva elektroforezu, cjelokupni proces amplifikacije i analize genetskog materijala vrši uređaj, a rezultat interpretira obučeni zdravstveni stručnjak.
sekvencioniranje
sekvencioniranje je molekularna tehnika koja se sastoji od određivanja slijeda nukleotida DNA, koji su formirajuće jedinice genetskog materijala. Sekvenciranje nastaje iz reakcije slične PCR, međutim, u amplifikacijskoj smjesi modificirani nukleotidi se dodaju fluorohromima koji, kako se materijal amplificira, modificirani nukleotidi su ugrađeni u DNK i stvaraju nekoliko fragmenata, odgovaraju proizvodu koji slijedi.
Produkt reakcije je smješten u uređaj zvan DNA sekvencerom, u kojem, kada se fragmenti dosegnu laserom opreme, fluokromi se pobude i emitiraju fluorescenciju, što oprema označava pomoću vrhova, pri čemu svaki vršak odgovara do nukleotida. Na kraju reakcije oprema će obavijestiti DNK slijed te će tako moći liječniku pomoći u dijagnozi genetskih bolesti..
